PRÁCTICA 1: DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE FACTORES REUMATOIDES (FR)
OBJETIVO
El objetivo de la técnica que se empleó era realizar una técnica de aglutinación en porta para que realizásemos una detección tanto cualitativa como semicuantitativa de los factores reumatoides en suero humano. Además las partículas de látex recubiertas con gamma-globulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra del paciente.
UTILIDAD CLÍNICA
Así que el objetivo sería detectar en un supuesto paciente la presencia de estos factores reumatoides, que no es más sino un anticuerpo que crea nuestro sistema inmune para hacer frente a una inmunoglobulina G propia (concretamente a la fracción Fc), por lo que este factor reumatoide actúa en verdad como un antígeno para nosotros. Esto es característico de las enfermedades autoinmunes, fundamentalmente en la artritis reumatoide.
REACTIVOS
Tras la ultima medición (positiva) lavamos la tarjeta con agua y jabón y la secamos bien. Seguidamente procedemos a realizar una medida semicuantitativa. Esto está basado en las diluciones seriadas. Para realizarla pusimos en cada uno de los círculos 50 µL de solución salina, luego unos 50 µL de muestra (suero) en el primer pocillo solamente, y entonces se homogeiniza con la pipeta automática y se cogen 50 µL y se llevan al segundo círculo y se vuelve a homogeneizar, y así sucesivamente hasta el último círculo, en el cuál se desechan los últimos 50 µL. NOTA: ¡Es importante homogeneizar con la micropipeta algo inclinada para evitar la formación de espuma!
Luego se añadió una gota de látex a cada uno de los círculos y agitamos con un palillo, cabe recordar de nuevo que es muy importante usar un palillo distinto para cada circulo. Agitamos durante dos minutos.
Como pudimos observar tras esperar ese tiempo fue que se aglutinó en los círculos con dilución 1/2 y 1/4 por lo que como la presencia de aglutinación indica una concentración de FR igual o superior a 8 UI/mL, concluimos que la concentración aproximada de FR en la muestra del paciente es de 32 UI/mL atendiendo a la fórmula:
8xTítulo de FR= x UI/mL
Cabe recordar que el título es la inversa de la dilución y como en este caso a sido de 1/4, el título sería 4.
FOTOS DEL PROCESO:
El objetivo de la técnica que se empleó era realizar una técnica de aglutinación en porta para que realizásemos una detección tanto cualitativa como semicuantitativa de los factores reumatoides en suero humano. Además las partículas de látex recubiertas con gamma-globulina humana son aglutinadas por factores reumatoides presentes en la muestra del paciente.
UTILIDAD CLÍNICA
Así que el objetivo sería detectar en un supuesto paciente la presencia de estos factores reumatoides, que no es más sino un anticuerpo que crea nuestro sistema inmune para hacer frente a una inmunoglobulina G propia (concretamente a la fracción Fc), por lo que este factor reumatoide actúa en verdad como un antígeno para nosotros. Esto es característico de las enfermedades autoinmunes, fundamentalmente en la artritis reumatoide.
REACTIVOS
- Látex (como ya hemos mencionado, recubiertos de gammaglobulina humana, pH 8,2)
- Control + (tapón rojo): Suero humano con concentración de FR superior a 30 UI/mL
- Control - (tapón azul): Suero animal, conservante.
- Suero (que equivaldría a la muestra del paciente)
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| Control + |
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| Control - |
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| Látex |
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| Suero (muestra del paciente) |
MATERIAL
PROCEDIMIENTO
Lo primero que realizamos fue realizar los controles + y - (lo realizaron solamente 5 compañeros de clase), ya que las muestras y reactivos ya se encontraban atemperados a temperatura ambiente.
Para ello depositamos 50 µL (o una gota) de control positivo y negativo sobre circulo distintos de la tarjeta, y a continuación agitamos bien el reactivo de látex y depositamos una gota junto a cada gota anterior. Posteriormente se realizó la mezcla con un palillo, extendiendo la mezcla por toda la superficie del círculo. NOTA: ¡Es importante extenderlo bien realizando circulos amplios!
Además es de suma importancia mezclar con palillos distintos, ya que si usamos el mismo nos darán resultados erróneos ya que el negativo daría positivo.
Tras ello se agita la tarjeta durante dos minutos (es importante no pasar ese tiempo para evitar falsos positivos). Transcurrido dicho tiempo observamos que el control + se ha aglutinado y el - no.
Medición cualitativa
Seguidamente, hicimos una medición cualitativa de una muestra, para ello pipeteamos unos 50 µL de muestra (suero) depositandolo en la tarjeta y seguidamente le pusimos una gota de látex, tras ello mezclamos con un palillo. (si se realiza más de una muestra en la misma tarjeta debe de realizarse con distintos palillos).
Tras ello agitamos durante dos minutos, y el resultado fue negativo.
Como debía salir positivo pensamos que la habiamos realizado mal, pero nos dimos cuenta que el suero estaba caducado, asi que al realizarlo con otro suero si nos dio positivo, por lo que al realizarlo todo de la misma forma, llegamos a la conclusion que salia negativo por ese suero.
Medición semicuantitativa
Tras la ultima medición (positiva) lavamos la tarjeta con agua y jabón y la secamos bien. Seguidamente procedemos a realizar una medida semicuantitativa. Esto está basado en las diluciones seriadas. Para realizarla pusimos en cada uno de los círculos 50 µL de solución salina, luego unos 50 µL de muestra (suero) en el primer pocillo solamente, y entonces se homogeiniza con la pipeta automática y se cogen 50 µL y se llevan al segundo círculo y se vuelve a homogeneizar, y así sucesivamente hasta el último círculo, en el cuál se desechan los últimos 50 µL. NOTA: ¡Es importante homogeneizar con la micropipeta algo inclinada para evitar la formación de espuma!
Luego se añadió una gota de látex a cada uno de los círculos y agitamos con un palillo, cabe recordar de nuevo que es muy importante usar un palillo distinto para cada circulo. Agitamos durante dos minutos.
Como pudimos observar tras esperar ese tiempo fue que se aglutinó en los círculos con dilución 1/2 y 1/4 por lo que como la presencia de aglutinación indica una concentración de FR igual o superior a 8 UI/mL, concluimos que la concentración aproximada de FR en la muestra del paciente es de 32 UI/mL atendiendo a la fórmula:
8xTítulo de FR= x UI/mL
Cabe recordar que el título es la inversa de la dilución y como en este caso a sido de 1/4, el título sería 4.
FOTOS DEL PROCESO:
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| Controles + (con aglutinación) y - (sin aglutinación) |
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| Añadiendo gota de látex a la gota de muestra. |
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Primer resultado (que dio negativo) como se puede observar en los círculos 1 y 2
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| Preparación de la disolución seriada |
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| Resultados de la medida semicuantitativa. Título: 4 |
OBSERVACIONES
Como ya hemos comentado la primera medida cualitativa nos salió negativa debido a que el suero estaba caducado, pero al realizar el segundo intento nos salió positivo, por lo que concluimos que no fue un fallo en la técnica ni de pipeteo ni de una manipulacion incorrecta, sino simplemente que el suero no estaba en las mejores condiciones.
Es importante saber que los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de ser usados debido a que la sensibilidad disminuye a temperaturas bajas.
Como ya hemos comentado la primera medida cualitativa nos salió negativa debido a que el suero estaba caducado, pero al realizar el segundo intento nos salió positivo, por lo que concluimos que no fue un fallo en la técnica ni de pipeteo ni de una manipulacion incorrecta, sino simplemente que el suero no estaba en las mejores condiciones.
Es importante saber que los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de ser usados debido a que la sensibilidad disminuye a temperaturas bajas.
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