DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE AC ANTI-TREPONEMA TPHA

29.10.19

OBJETIVO:

Es la detección cualitativa y semicuantiva indirecta en microplaca de Ac especificos anti-Treponema pallidum.

FUNDAMENTO:

La sífilis es una enfermedad venerea provocada por la infección con T. pallidum. La transmisión de produce por contacto directo a traves de una lesión productiva. Los Ac anti-Treponema aparecen a partir de la primera fase y pueden permanecer en un 85-90% de pacientes tratados a pesar de haber superado la enfermedad.

Material necesario:
  • Micropipeta y puntas
  • Placa de microtiter
Reactivos
  • R1: Células Test (TC): Hematíes de ave estabilizados y sensibilizados con Ag de T.pallidum
  • R2: Células Control (CC): Suspensión estabilizada de hematíes de ave
  • R3: Diluyente: Tampón fosfato

PROCEDIMIENTO

Método cualitativo:

Lo que hicimos fue poner en la primera fila de placa microtiter  la Muestra en el primer pocillo, y en el segundo el control muestra. Para ello realizamos lo siguiente:
_ En el pocillo de muestra ponemos 25 µL de muestra (que ya venía diluida al 1/20, de no ser así habría que diluirla) y también ponemos 75 µL de células test (R1) y homogeneizamos
_En el pocillo control ponemos 25 µL de muestra y 75 de células control (R2).




Método semicuantitativo:

Aquí lo que hicimos fue en la segunda fila de pocillos, depositar en 4 pocillos 25 µL de R3 (diluyente) y seguidamente depositar 25 µL de muestra ya diluida al 1/20 en el primer pocillo, y vamos realizando la batería hasta el cuarto pocillo, desechando el último volumen de paso, luego le añadimos a cada pocillo 50 µL de células control. De esta forma obtuvimos las siguientes diluciones:
_tubo 1: 1/40
_tubo 2: 1/80
_tubo3: 1/160
_tubo 4: 1/320


Seguidamente homogeneizamos un poco y lo dejamos 1 hora tapándolo con parafilm.

Transcurrido el tiempo pudimos comprobar como se aglutinó solo en el primero por lo que es positivo y el título sería 40.


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