PRÁCTICA 5: DETERMINACIÓN CUALITATIVA Y SEMICUANTITATIVA DE ANTI- ESTREPTOLISINA O (ASO)

OBJETIVO

De nuevo por esta práctica íbamos a reforzar nuestros conocimientos de inmunidad y aglutinación, dado que dicha técnica se usa también en tarjeta o porta y se usa con partículas de látex recubiertas de estreptolisina O humano en suero humano, en caso de que el suero contenga Ac ASO aglutinarán con las partículas de látex

FUNDAMENTO

La estreptolisina O es una exoenzima inumnogénica tóxica producida por el estreptococos 𝛃-hemolíticos de los grupos A, C y G. La cuantificación de Ac ASO se utiliza para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades como fiebres reumáticas, glomerulonefritis aguda... Dichas fiebres es una enfermedad inflamatoria que afecta al tejido conectivo de diversas zonas y la glomerulonefritis es una inflamación del riñón que afecta a los glomérulos renales.

Reactivos:

• Látex: suspensión de partículas de látex cubiertas con SLO, pH 8,2
• Control + (rojo): Suero humano con concentración de ASO >200 UI/mL
• Control - (azul): Suero animal
• Es importante añadir que en esta práctica al no disponer de suero sanguíneo, usamos un control +

Material:

• Micropipeta y puntas
• Vaso para desechos
• Tarjeta con fondo negro

PRECAUCIONES:

• Respetar la conservación y estabilidad de los componentes como respetar fecha de caducidad, mantenerlos a una temperatura indicada, no congelar, siempre en posición vertical, etc.

PROCEDIMIENTO:

Método cualitativo:

Depositamos 50 µL de control positivo y otros 50 µL de control negativo sobre un círculo distinto.

Luego se agita el reactivo de PCR- Látex y se deposita una gota sobre los controles.

Luego se mezclan ambas gotas con un palillo realizando círculos hacia el exterior ocupando toda la superficie del círculo, cambiando de palillo para cada círculo.

Tras ello agitamos la tarjeta suavemente durante dos minutos, con cuidado de no sobrepasar el tiempo para que no de un mal resultado.

Se observó los resultados.

Método semicuantitativo:

Normalmente, se hace el método cualitativo antes, pero para practicar pasamos directamente al semicuantitativo.

se añaden 50 µL de solución salina en cada uno de los círculos y luego 50 µL del suero de paciente (control +) en el primer circulo solamente, tras ello homogeneizamos y pasamos 50 µL al segundo círculo (con la micropipeta siempre inclinada para evitar burbujas) y así hasta el ultimo donde se desecha el ultimo volumen de paso.

Realizando batería

Tras ello se deposita una gota de látex en cada uno de los círculos y se mezclan con un palillo (usando siempre palillos distintos).

Tras ello lo dejamos reposar 2 minutos.

A continuación se pudo observar solo aglutinación en el primer circulo, por lo que el título sería 2.

Debemos saber que el título es la inversa de la máxima dilución donde hay aglutinación.

Entonces para obtener la concentración multiplicamos por el factor que nos viene indicado, que en este caso es 200.

200 x Título de PCR= X UI/mL

200 x 2 = 400 UI/mL

Control positivo, negativo y prueba semicuantitativa

donde se puede apreciar la aglutinación en el primer

círculo, por lo que el título es 2