RPR-carbon. Determinación cualitativa de reaginas plasmáticas.
22.10.19
OBJETIVO
Determinar cualitativamente la presencia de reaginas plasmáticas en suero humano, ya que se utilizan partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos y son aglutinadas si hay presencia de reaginas en la muestra del paciente que estuviese afectado por sífilis.
FUNDAMENTO
Es una técnica no treponémica de aglutinación para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas presentes en suero humano.
Las reaginas son grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que sufren infección por Treponema pallidum, agente causal de las sífilis. Este microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón, liberando al torrente circulatorio pequeños fragmentos de este órgano.
Material necesario:
PROCEDIMIENTO:
Homogeneizar PRP- carbón con suavidad antes de su uso.
Se abre el vial y se acopló la micropipeta al vial dispensador de plástico y se aspiró por succión la cantidad de reactivo necesaria.
1. Determinación cualitativa
Primero se realiza los controles positivo y negativo (realizamos uno por mesa).
Para ello ponemos sobre una tarjeta 50 uL de control + y otros 50 de control - sobre distintos círculos de la tarjeta.
Seguidamente se mezcla con reactivo PRP-carbon, para mezclarlo se agita antes vigorosamente e invertimos el vial dispensador como hemos dicho anteriormente. Dispensamos con la aguja una gota (20uL).
Luego se mezclan las gotas con una punta de micropipeta procurando extender bien hacia el exterior, se usa un palillo distinto para cada círculo.
Muestra:
Para realizar la muestra, la cuál hicimos una por persona, procedimos de la siguiente manera:
Primero depositamos 50 µL de muestra sobre un círculo de la tarjeta y seguidamente echamos una gota del RPR - carbón sobre dicha muestra, seguidamente mezclamos con un palillo, realizando círculos hacia fuera
NOTA: Como no teníamos suero, lo realizamos con un control +.
Luego situamos las tarjetas sobre un agitador rotatorio a 80 rpm durante 8 minutos. Además es importante añadir que no se debe exceder el tiempo o se obtendrán falsos positivos.
Lectura:
Como al principio no se veía bien, lo observamos con un contador de colonias, usándolo de lupa y ya pudimos apreciar la aglutinación.
OBSERVACIONES:
En esta práctica no realizamos método semicuantitativo.
OBJETIVO
Determinar cualitativamente la presencia de reaginas plasmáticas en suero humano, ya que se utilizan partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos y son aglutinadas si hay presencia de reaginas en la muestra del paciente que estuviese afectado por sífilis.
FUNDAMENTO
Es una técnica no treponémica de aglutinación para la detección cualitativa y semicuantitativa de reaginas plasmáticas presentes en suero humano.
Las reaginas son grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del propio organismo, originadas en pacientes que sufren infección por Treponema pallidum, agente causal de las sífilis. Este microorganismo produce lesiones en el hígado y corazón, liberando al torrente circulatorio pequeños fragmentos de este órgano.
Material necesario:
- Micropipeta y puntas
- Vaso para desechos
- Tarjeta
- R1 (PRP) Carbón: partículas de carbón sensibilizadas con una mezcla de lípidos y colesterol.
- Control +: Suero artificial con un título de reaginas
- Control -: Suero animal. Conservante
Homogeneizar PRP- carbón con suavidad antes de su uso.
Se abre el vial y se acopló la micropipeta al vial dispensador de plástico y se aspiró por succión la cantidad de reactivo necesaria.
1. Determinación cualitativa
Primero se realiza los controles positivo y negativo (realizamos uno por mesa).
Para ello ponemos sobre una tarjeta 50 uL de control + y otros 50 de control - sobre distintos círculos de la tarjeta.
Seguidamente se mezcla con reactivo PRP-carbon, para mezclarlo se agita antes vigorosamente e invertimos el vial dispensador como hemos dicho anteriormente. Dispensamos con la aguja una gota (20uL).
Luego se mezclan las gotas con una punta de micropipeta procurando extender bien hacia el exterior, se usa un palillo distinto para cada círculo.
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| Controles + y - |
Muestra:
Para realizar la muestra, la cuál hicimos una por persona, procedimos de la siguiente manera:
Primero depositamos 50 µL de muestra sobre un círculo de la tarjeta y seguidamente echamos una gota del RPR - carbón sobre dicha muestra, seguidamente mezclamos con un palillo, realizando círculos hacia fuera
NOTA: Como no teníamos suero, lo realizamos con un control +.
Luego situamos las tarjetas sobre un agitador rotatorio a 80 rpm durante 8 minutos. Además es importante añadir que no se debe exceder el tiempo o se obtendrán falsos positivos.
Lectura:
Como al principio no se veía bien, lo observamos con un contador de colonias, usándolo de lupa y ya pudimos apreciar la aglutinación.
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| Pipeteando control + que actuaba de suero |
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| Dispensando muestra |
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| Echando gota de RPR carbón |
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| Mezclando con punta de pipeta |
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| Tarjetas en agitador rotatorio |
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Aunque en la foto no se aprecia porque pierde calidad, a simple vista era
visible la aglutinación
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OBSERVACIONES:
En esta práctica no realizamos método semicuantitativo.
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